◆實驗過程中沒有純化步驟,我如何將未標記上的熒光染料除去?該問題描述了我們研發(fā)的關鍵因素,我們獨特的染料、緩沖液組分以及完善的標記策略已經完美地解決了這個問題,具體機制涉及專利保護,不便透露。◆Super-n-stain? 試劑盒可用于多色免疫標記嗎,不同抗體間是否會發(fā)生染料轉移?Super-n-stain? 試劑盒抗體與染料是共價結合方式,不存在染料擴散和轉移現(xiàn)象。詳細信息請參照上面產品說明部分。◆Super-n-stain? 試劑盒可用于標記抗體以外的蛋白嗎?該試劑盒是針對 IgG 抗體標記優(yōu)化設計的,不推薦用于標記其它蛋白。Super-n-stain? 標記條件可能會導致 IgM 變性。◆Super-n-stain? 試劑盒標記一抗和二抗的靈敏性是否一樣?直接免疫熒光檢測信號會弱于間接檢測,詳細信息請參照上面產品說明部分。◆用標記二抗的間接標記相比,直接標記復合物有哪些優(yōu)勢?直接免疫染色避免了二抗孵育和清洗的步驟,容許來自同一物種的多個抗體同時使用進行多色檢測,可以使用來自同一物種的抗體進行動物組織染色,從而避免了二抗的交叉反應。◆Super-n-stain? 試劑盒與 Invitrogen’s Zenon 抗體標記試劑盒相比,有哪些優(yōu)勢?主要優(yōu)勢:1. YF 染料與抗體共價結合避免了多重染色時染料轉移和擴散現(xiàn)象;2. Super-n-stain? 復合物在儲液中可穩(wěn)定保存幾個月之久,而 Zenon 標記物必須在 30min 內使用;3. Super-n-stain? 復合物體積更小些,因為染料直接與抗體結合,而 Zenon 復合物與抗體片段配合使用;4. 無需進行 YF 染料與標記蛋白的比例優(yōu)化,直接混合、染色即可;5. 無需進行后染固定;6.沒有種屬特異性◆Super-n-stain? 試劑盒與 Innova Bioscience Lightning-link 快速抗體標記試劑盒相比,有哪些優(yōu)勢?
Super-n-stain? 試劑盒使用熒光更亮、光穩(wěn)定性更好的 YF 染料,試劑盒規(guī)格更靈活,可提供至單個抗體標記反應。
◆什么是 YF 染料?
YF 染料是一種水溶性較好、用于標記蛋白和核酸的小分子有機染料。我們可提供多達 20 種的此類 YF 染料。◆我應如何選擇 Super-n-stain? 試劑盒?
每種 YF 染料,我們都提供三種不同抗體標記量的試劑盒,分別是:5-20 μg, 20-50 μg, 50-100 μg。對于沒有穩(wěn)定劑的抗體標記,根據(jù)抗體規(guī)格,選擇其中一種即可,含有穩(wěn)定劑的抗體標記,請參考產品描述中的表 1。◆若待標記抗體總量適用于兩種 Super-n-stain? 試劑盒,我應如何選擇?
例如:標記 50 μg 抗體,我應購買 50-100 μg 抗體標記試劑盒還是 20-50μg 的試劑盒?
遇到這種情況,兩種規(guī)格都可以得到較好的結果,使用較小規(guī)格的效果更好。
◆如何選擇染料與蛋白的比例獲得較好的標記效果?
如果待標記的抗體量在試劑盒范圍內,無需改變染料量或反應時間,因為 Super-n-stain? 試劑盒中染料和反應緩沖液可以確保較好的標記效果。◆我可以拆分試劑盒組分,以便多次使用嗎?不行,因為 Super-n-stain? 試劑盒已經優(yōu)化至一個標記單位,我們不建議拆分試劑盒以標記多個抗體或多次使用。◆抗體濃度是否影響標記效率?Super-n-stain? 試劑盒較好的標記抗體濃度為 0.5-1 mg/mL,您可通過濃縮或稀釋使待標記抗體達到上述濃度范圍,小于或超過該濃度范圍,會導致標記效率過低或過多。◆使用標記后的抗體進行免疫熒光染色未觀察到熒光信號?與供應商聯(lián)系,確??贵w組分、濃度在容許范圍內。◆使用標記后的抗體進行免疫熒光染色未觀察到熒光信號怎么辦?
與供應商聯(lián)系,確??贵w組分、濃度在容許范圍內。在直接標記前,應確定用于間接標記的一抗的敏感性和特異性。為了得到與間接標記相同的信號強度,直接標記時需要使用更高濃度的一抗,更多信息請參考產品應用部分。共價標記可能會影響某些抗體的反應活性??梢酝ㄟ^實驗確定是否是這一因素的原因,即使用 Super-n-stain? 標記的一抗和熒光標記的二抗進行間接免疫染色,以確定 Super-n-stain? 標記后的一抗是否仍具有反應活性。如果有兼容 YF 染料的激發(fā)/發(fā)射波長的熒光讀膠儀或掃描儀,可以通過 SDS-PAGE 電泳確定抗體是否標記上染料,取 0.1-0.5 μg 標記抗體進行變性 SDS-PAGE電泳,然后進行凝膠拍照,你應該可以觀察到 IgG 的 55 kDa 的重鏈和 25 kDa 的輕鏈對應的兩條熒光條帶。