產(chǎn)品概述:儲存條件 4℃避光保存,有效期見外包裝。開封后,保存溫度詳見說明書。 組分
24T
48T
96T
使用方法
開封后保存條件
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A.標準品
1000 pg
1000 pg
2×1000 pg
按說明書進行稀釋
-20℃可存放一月
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B.標準稀釋液
16 mL
16 mL
16 mL
即用型
4℃可存放一月
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C.濃縮生物素化抗體(100×)
15μL
30 μL
2×30 μL
按說明書進行稀釋
(現(xiàn)配現(xiàn)用)
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D.生物素化抗體稀釋液
16 mL
16 mL
16 mL
即用型
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E.濃縮酶結(jié)合物(避光100×)
30 μL
60 μL
2×60 μL
按說明書進行稀釋
(現(xiàn)配現(xiàn)用)
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F.酶結(jié)合物稀釋液
16 mL
16 mL
16 mL
即用型
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G.濃縮洗滌液(20×)
16 mL
16 mL
25mL
即用型
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H.顯色劑(避光)
6 mL
6 mL
12mL
即用型
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I.終止液
12mL
12mL
12mL
即用型
4℃或常溫保存
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J.預(yù)包被96孔板
8×3
8×6
8×12
即用型
密封干燥4℃保存
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K.封板膠紙
1張
2張
4張
即用型
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注:終止液和顯色劑具有腐蝕性,一旦接觸到液體,請盡快用大量清水沖洗。
產(chǎn)品介紹 Mouse TNF-α ELISA Kit (Mouse Tumor Necrosis Factor-α Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ,即小鼠腫瘤壞死因子α ELISA 試劑盒,可以定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液等樣本中的天然和重組 TNF-α濃度。TNF-α是一種主要由單核細胞和巨噬細胞產(chǎn)生的單核因子。小鼠的 TNF-?基因長約 2.78 kb,由 4 個外顯子和 3 個內(nèi)含子組成。小鼠 TNF-?前體含 235 個氨基酸殘基,信號肽為 79 氨基酸殘基。成熟的小鼠 TNF-?分子量為 17 kDa,由 156 個氨基酸殘基組成,第 69 位和 100 位兩個半胱氨酸形成分子內(nèi)二硫鍵,有一個糖基化點,但糖基化不影響其生物學(xué)功能。鼠與人的 TNF-?有 79%氨基酸組成同源性,TNF-?的生物學(xué)作用無明顯的種屬特異性。小鼠的 TNF-?是由活化的巨噬細胞及其它類型的細胞,包括 T 細胞和 B 細胞,NK 細胞,LAK 細胞,星形膠質(zhì)細胞,內(nèi)皮細胞,平滑肌細胞和某些腫瘤細胞產(chǎn)生。TNF-α的生物學(xué)活性非常復(fù)雜,包括對造血、免疫和炎癥的調(diào)節(jié);對血管和凝血的影響和對多種器官(肝、心臟、骨、軟骨、肌肉和其它組織)的作用。如殺傷或抑制腫瘤細胞;提高中性粒細胞的吞噬能力,增加過氧化物陰離子產(chǎn)生,增強 ADCC 功能,刺激細胞脫顆粒和分泌髓過氧化物酶;抗感染;促進髓樣白血病細胞向巨噬細胞分化;促進細胞增殖和分化等。在臨床上,應(yīng)用 TNF 在治療腫瘤等方面開始臨床Ⅱ 期試驗,也可與 IL-2 聯(lián)合治療腫瘤。TNF-α的抗腫瘤作用包括 TNF-α的直接作用和 TNF-α誘導(dǎo)的針對腫瘤的免疫應(yīng)答。TNF-α參與包括哮喘,Π型糖尿病,Crohn’s 病,和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病。TNF 刺激內(nèi)皮細胞,導(dǎo)致炎癥、組織損傷和凝血從而誘發(fā)感染性休克。TNF-α又稱惡液素,可誘發(fā)機體發(fā)生惡液質(zhì)。TNF 還具有類似 IFN 抗病毒作用,阻止病毒早期蛋白質(zhì)的合成,從而抑制病毒的復(fù)制,并與 IFN-α和 IFN-γ協(xié)同抗病毒作用。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣品中小鼠 TNF-α濃度。在小鼠TNF-α單克隆抗體預(yù)包被酶標板中加入適度稀釋的樣品和標準品,其中的TNF-α?xí)c其單抗結(jié)合,洗去游離成分;加入生物素化的抗小鼠TNF-α抗體,抗小鼠 TNF-α抗體與結(jié)合在單抗上的小鼠TNF-α結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,洗去游離的成分;加入辣根過氧化物酶標記的親合素,生物素與親合素特異性結(jié)合,洗去未結(jié)合的酶結(jié)合物;加入顯色劑,若反應(yīng)孔中有TNF-α,辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現(xiàn)藍色;加終止液變?yōu)辄S色。在450 nm下測OD值,小鼠TNF-α濃度與OD 450值之間呈正比,可通過繪制標準曲線計算出樣品中小鼠TNF-α濃度。
說明書:UE-M6152S/M6152M/M6152L 常見問題解答:◆背景信號強是什么原因?1.洗板不充分。將洗滌緩沖液加入孔中洗滌,確保孔區(qū)域洗滌充分;確保已在洗滌前棄去所有殘留抗體溶液;增加洗滌次數(shù)。2.鏈親和素-HRP結(jié)合物過量。檢查偶聯(lián)物的稀釋度,在推薦的稀釋度下使用。3.封閉不充分。檢查封閉液;延長封閉時間。4.孵育時間過長。縮短孵育時間。5.樣品或標準品中含干擾物質(zhì)。設(shè)置對照。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆沒有信號?1.試劑添加順序錯誤或試劑配制不正確。重復(fù)實驗;檢查試劑配制方法;復(fù)核試驗試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量;增加抗體用量(濃度)。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復(fù)溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用ELISA板,而非組織培養(yǎng)板;使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現(xiàn)規(guī)則藍色?1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結(jié)合過氧化物酶。嚴格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預(yù)混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標準曲線差?1.鏈親和素-HRP結(jié)合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用酶標板,而非組織培養(yǎng)板;使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時間不足。延長底物溶液孵育時間。5.實驗操作流程有誤。嚴格按照說明書操作流程。6.標準曲線稀釋計算錯誤。重新計算制作新的標準曲線。
使用本產(chǎn)品的文獻:1.Scutellarin potentiates vancomycin against lethal pneumonia caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus through dual inhibition of sortase A and caseinolytic peptidase PAuthor links open overlay panelXingyeWang,LinWei,LiWang,XiaoyuChen,XiangriKong,YanheLuan,JiyuGuan,XueruiGuo,YanShi,TiedongWang,BingmeiWang,WuSong, YichengZhaoBiochemical Pharmacology