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NEB/PURExpress??Δ?(aa, tRNA) Kit/E6840S/10 reactions
  • NEB/PURExpress??Δ?(aa, tRNA) Kit/E6840S/10 reactions

NEB/PURExpress??Δ?(aa, tRNA) Kit/E6840S/10 reactions

價格: ￥3924.00 市場價: 6540.00
品牌: NEB
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    • Description:

      Arapidmethodforgeneexpressionanalysis,PURExpress?isanovelcell-freetranscription/translationsystemreconstitutedfromthepurifiedcomponentsnecessaryforE.colitranslation.Withminimalnucleaseandproteaseactivity,thePURExpresssystempreservestheintegrityofDNAandRNAtemplates/complexesandresultsinproteinsthatarefreeofmodificationanddegradation.Transcriptionandtranslationarecarriedoutinaone-stepreaction,andrequirethemixingofonlytwotubes.Withresultsavailableinafewhours,PURExpresssavesvaluablelaboratorytimeandisidealforhighthroughputtechnologies.

      PURExpressCitations

      Figure1:ProteinexpressionusingthePURExpress?InVitroProteinSynthesisKit.Figure 1: Protein expression using the PURExpress? In Vitro Protein Synthesis Kit.

      25μlreactionscontaining250ngtemplateDNAand20unitsRNaseInhibitorwereincubatedat37°Cfor2hours.2.5μlofeachreactionwasanalyzedbySDS-PAGEusinga10–20%Tris-glycinegel.Thereddotindicatestheproteinofinterest.MarkerMistheProteinLadder(NEB#P7703).

      Figure2:?Incorporationof35S-methionineenablesvisualizationofproteinbyautorADIography.
      Figure 2: Incorporation of 35S-methionine enables visualizationof protein by autoradiography.
      25μlreactionscontaining250ngtemplateDNA,20unitsRNaseInhibitorand2μl35S-metwereincubatedat37°Cfor2hours.2.5μlofeachreactionwasanalyzedbySDS-PAGE,thegelwasfixedfor10minutes,driedfor2hoursat80°Candexposedtox-rayfilmfor5hoursat-80°C.

      Figure3:SchematicdiagramofproteinsynthesisandpurificationbyPURExpress.Figure 3: Schematic diagram of protein synthesis and purification by PURExpress.

      Figure4:ExpressionandreversepurificationofDHFR(A)andT4DNALigase(B)usingPURExpress.Figure 4: Expression and reverse purification of DHFR (A) and T4 DNA Ligase (B) using PURExpres

      125μlreactionswerecarriedoutaccordingtorecommendationsintheaccompanyingmanual.Sampleswereanalyzedona10–20%Tris-glycinegelandstainedwithCoomassieBlue.Notethatinbothcases,thedesiredproteincanbevisualizedinthetotalproteinfraction.Thereddotindicatestheproteinofinterest.MarkerMistheProteinLadder(NEB#P7703).


      KitComponents

      Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:

      Storeat(°C)Concentration
      Control(DHFR)template
      E.colitRNA?(25?μl)
      AminoAcidMix?(25?μl)
      PURExpressSolutionB3.3X
      PURExpressSolutionA(-aa,tRNA)

      Notes:

      Forapositivecontrolreaction,use2μlofthesuppliedDHFRcontroltemplateand2.5μleachofthesuppliedaaandtRNA.Eachkitcontainssufficientreagentsfor10x25μlreactions.TheaminoacidsandtRNAaresuppliedseparately,allowinguserstoperformaproteinsynthesisreactionbyaddingmodifiedaminoacidsandtRNAmixturetothereaction.AddSolutionBtoSolutionA,donotdiluteSolutionBunbuffered.Werecommendastartingconcentrationof250ngtemplateDNAper25?μlreaction.TheoptimalamountofinputDNAcanbedeterminedbysettingupmultiplereactionsandtitratingtheamountoftemplateDNAaddedtothereaction.Typically,theoptimalamountwillfallinarangeof25-1000ngtemplateper?μlreaction.PURExpressDHFRControlTemplatesequencefiles:Fasta,GenBankTheDHFRcontroltemplateisnowsuppliedat125ng/μl.Use2?μlforapositivecontrolreaction.TemplateDNA,particularlyplasmidDNApreparedbymini-prep(e.g.Qiagen)isoftenthemajorsourceofRNasecontamination.Westronglyrecommendadding20unitsMurineRNaseInhibitor?(NEB#M0314)toeachreaction.
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