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螞蟻淘/APC-Annexin V/PI 細胞凋亡試劑盒/50T/A6030M
  • 螞蟻淘/APC-Annexin V/PI 細胞凋亡試劑盒/50T/A6030M

螞蟻淘/APC-Annexin V/PI 細胞凋亡試劑盒/50T/A6030M

價格: ￥995.00 市場價: 1658.33
貨號: A6030M
品牌: ebiomall
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    • 產(chǎn)品概述：儲存條件4℃ 避光冷藏，請勿凍存。有效期見外包裝。

      組分

      規(guī)格

      A6030S（10T）

      A6030M（50T）

      A6030L（100T）

      A. 1×Annexin V 結(jié)合緩沖液

      10 mL

      50mL

      50 mL×2

      B. Annexin V-APC

      50 μL

      250 μL

      500 μL

      C. PI

      100 μL

      500μL

      1mL

      光譜特性Annexin V-APC: Ex/Em = 650/660 nmPI: Ex/Em=535 nm/617 nm (with DNA) 產(chǎn)品介紹Annexin V-APC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒是用遠紅外熒光蛋白 APC（Allophycocyanin）標記的 Annexin V 作為探針，來檢測細胞早期凋亡的發(fā)生；PI 用來檢測晚期凋亡細胞或者壞死細胞。因此將 Annexin V-APC 與 PI 聯(lián)合使用，可以區(qū)分早凋與晚凋細胞?？捎昧魇郊毎麅x或其他熒光檢測設(shè)備進行檢測。注意事項1. 熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
      說明書：UE-A6030S/A6030M/A6030L
      MSDS：MSDS A6030 Annexin V-APC&PI
      常見問題解答：◆為何染色結(jié)果顯示細胞凋亡率過高？1. 凋亡時間處理過長，使細胞全部死亡。建議重新摸索細胞凋亡條件，使細胞處于不同的凋亡狀態(tài)。2. 對于貼壁細胞，胰蛋白酶消化時間過長或機械刮擦細胞會暫時破壞質(zhì)膜，使Annexin V能夠與細胞膜胞內(nèi)面上的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，導致假陽性染色。建議在胰蛋白酶消化或機械刮擦細胞后，讓細胞在最佳細胞培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基中培養(yǎng)約30分鐘，以恢復其膜完整性。◆實驗結(jié)果使用什么儀器觀察？實驗結(jié)果可以通過流式細胞儀和熒光顯微鏡進行觀察，但更推薦使用流式細胞儀。因為正常的細胞和凋亡的細胞膜上都有磷脂酰絲氨酸（PS），只是凋亡細胞膜外更多，可以結(jié)合更多的Annexin V，流式細胞儀更靈敏，可以區(qū)分出微小差異，將正常細胞與凋亡細胞分成不同的兩群，但如果用熒光顯微鏡，可能觀察不到這一差別，尤其是貼壁細胞。若要在成像測定中檢測細胞凋亡，推薦使用SuperView? 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。◆流式細胞儀檢測細胞凋亡，結(jié)果圖中的各個象限代表什么狀態(tài)的細胞？左上角：Annexin V-/PI+，機械損傷細胞；右上角: AnnexinV+/PI+，晚期凋亡細胞或壞死；右下角：AnnexinV+/PI-，早期凋亡細胞；左下角：AnnexinV-/PI-，正常細胞。◆這款試劑盒可同時檢測出凋亡率和細胞周期分布嗎？不可以。檢測細胞凋亡時PI結(jié)合的是核酸，包括DNA和RNA。而PI用于檢測細胞周期時需要只結(jié)合DNA，由于RNA的干擾，用細胞凋亡檢測試劑盒測出來的細胞周期不準。同時，凋亡檢測與周期檢測時PI的工作濃度以及樣本處理都不一樣。 如果需要進行細胞周期檢測，推薦Cell Cycle and Apoptosis Kit（C6031）◆各象限代表的細胞狀態(tài)問題？Q1：(AnnexinV-染料)-/PI+，此區(qū)域的細胞為壞死細胞。也可能有少數(shù)的晚期凋亡細胞在其中，甚至機械損傷的細胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多，實驗結(jié)果越不可信，建議實驗中盡量控制這一象限細胞比例。Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+，此區(qū)域的細胞為晚期凋亡細胞或壞死。Q3：(AnnexinV-染料)+/PI-，此區(qū)域的細胞為早期凋亡細胞。Q4：(AnnexinV-染料)-/PI-，此區(qū)域的細胞為活細胞。

      ◆假陽性問題？

      1. 消化液中含有EDTA或消化時間過長引起的假陽性。Annexin V和PS的結(jié)合需要Ca2+，而EDTA是Ca2+螯合劑，使用含有EDTA的胰酶會造成假陰性。其次消化時間不宜過長，吹打細胞要輕柔，因為胰酶的過度消化和機械損傷都會引起細胞膜的損傷，造成假陽性。細胞消化下來后，建議在培養(yǎng)箱中在孵育30min，使細胞膜恢復完整性，避免假陽性，或者將細胞報訊在含2% BSA的PBS中，防止進一步的損傷。2. 如果樣品來源于血液，必須去除血液中的血小板，因為血小板含有PS，能與Annexin V結(jié)合，干擾實驗結(jié)果。建議：可以含有EDTA的緩沖液200g離心去除血小板， 最后細胞多洗幾遍，減小EDTA螯合鈣離子產(chǎn)生的影響。3. 神經(jīng)細胞膜容易破壞外翻，導致假陽性，所以Annexin V/PI 雙染法流式檢測細胞凋亡不適用于神經(jīng)細胞。4. 誘導時間過長。一般情況下誘導幾個小時就可以出現(xiàn)早期凋亡，因此通常不需要處理大于48小時以上，誘導時間過長會使營養(yǎng)物質(zhì)耗盡，導致細胞狀態(tài)差，假陽性結(jié)果偏高。◆熒光染料選擇的問題？1. 實驗樣本是否帶熒光，因為感染病毒或質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細胞往往帶GFP熒光，GFP與YF488/FITC通道重疊，不能選擇YF488/FITC標記的Annexin V，此時如果只有488 nm一根激光管可以用PE標記Annexin V，用7-AAD代替PI，若有633 nm激光管，可以改用YF647 Annexin V代替YF488。2. 如果流式細胞儀帶有488 nm和633 nm兩個或以上激光管，首先考慮用APC或YF647標記 Annexin V，因為它和PI通道幾乎不用考慮光重疊問題，可以減少調(diào)節(jié)補償?shù)臒?，如果只?88 nm激光管則可選擇YF488/FITC標記的Annexin V。3. 處理因素是否帶有熒光，本實驗室就碰到過一個促凋亡藥物Doxorubicin本身發(fā)紅色熒光，對PI通道的檢測造成嚴重干擾，而且濃度越大干擾越明顯。這時建議選用A6079或Y6102 。◆圈門問題？1.要特別注意在FSC/SSC圈門時，所選細胞范圍會對結(jié)果造成較大影響，所以在分析數(shù)據(jù)時，要把所有細胞都圈進FSC/SSC的門內(nèi)，這樣實驗結(jié)果才會更可信。如圖，使細胞群大概位于對角線上，并且細胞群較集中，群內(nèi)細胞比例要在80%以上，如果細胞全部圈入，細胞比例才50%或者更低，說明細胞被壓在了坐標軸上，這時要重新調(diào)節(jié)FSC和SSC。2.貼壁細胞做Annexin V凋亡檢測，通常分群不太規(guī)則，這時我們可以根據(jù)不加藥細胞來畫不規(guī)則的十字門。如上面圖形的設(shè)門方式：

      ◆免疫染色與凋亡染色順序問題?

      Annexin V凋亡染色可以和抗體一起對細胞進行染色嗎？可以，但建議Annexin V和其它抗體分開染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同時標記淋巴細胞，可以先在PBS中標記CD3/CD8后洗去，再在Binding buffer（含鈣離子）中標記Annexin V。◆這款試劑盒可同時檢測出凋亡率和細胞周期分布嗎？不可以。檢測細胞凋亡時PI結(jié)合的是核酸，包括DNA和RNA。而PI用于檢測細胞周期時需要只結(jié)合DNA，由于RNA的干擾，用細胞凋亡檢測試劑盒測出來的細胞周期不準。同時，凋亡檢測與周期檢測時PI的工作濃度以及樣本處理都不一樣。 若果需要進行細胞周期檢測，推薦Cell Cycle and Apoptosis Kit（C6031）◆固定、冷凍、切片或解離的組織，還可以做流式細胞分析嗎？不建議做流式細胞分析。因為流式細胞分析要求細胞分散、單個，活性好，這些狀態(tài)下的樣本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影響，因此無法依賴膜的完整性區(qū)分健康細胞和凋亡細胞。組織在凍存、復溫的過程中會有大量的細胞死亡，同時經(jīng)過這一過程的組織在分離成單個細胞的時候會形成許多細胞碎片，不宜上流式檢測，所以用于流式檢測的標本最好是新鮮標本，即取材后立即檢測，效果最好。 液氮保存的◆組織塊，可以將組織標本進行切片，然后做原位染色，觀察組織細胞的凋亡。◆Annexin V可以用在植物和細菌中嗎？Annexin V也可以用在植物和細菌中檢測凋亡，具體實驗步驟可參考相關(guān)文獻。
    使用本產(chǎn)品的文獻：參考文獻1.Terminating the criminal collaboration in pancreatic cancer: Nanoparticle-based synergistic therapy for overcoming fibroblast-induced drug resistance.應用方向：檢測胰腺導管腺癌（PDAC）細胞的凋亡2.Ribosomal protein L23 negatively regulates cellular apoptosis via the RPL23/Miz-1/c-Myc circuit in higher-risk myelodysplastic syndrome.應用方向：檢測高危骨髓增生異常綜合征（MDS）患者CD34+細胞的凋亡3.Chlamydia trachomatis plasmid-encoded protein Pgp3 inhibits apoptosis via the PI3K-AKT-mediated MDM2-p53 axis.應用方向：檢測Hela細胞的凋亡
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